Տեղեկատվություն

Զոնդի ուժեղացում MLPA-ում

Զոնդի ուժեղացում MLPA-ում


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Ես կարդում եմ հոդված MLPA-ի մասին (Multiplex ligation-dependent probe amplification) և խրվել եմ այս նախադասության վրա.

Զոնդը երկու մասի բաժանելու առավելությունն այն է, որ ուժեղացված են միայն կապակցված օլիգոնուկլեոտիդները, բայց ոչ չկապված զոնդերի օլիգոնուկլեոտիդները:

Ես չեմ հասկանում սկզբունքն այն է, թե ինչու չլիգացված օլիգոնուկլեոտիդները չեն ուժեղացվի: Ինչպես PCR-ի իմ ներկայիս պատկերացումներն են, այբբենարանները սովորաբար պետք է զտվեն և ստեղծեն բեկորներ, որոնք կավարտվեն օլիգոնուկլեոտիդի վերջում («կապակցման վայրում», այնպես որ դրանք ավելի կարճ կլինեն, բայց դրանք պետք է լինեն այնտեղ), սխալվու՞մ եմ: ?


Ես աշխատում եմ MRC-Holland-ում՝ MLPA-ի մշակողը, և այն, ինչ բացատրում է Kacper-ը, իսկապես այդպես է: Ցանկացած RPO (աջ զոնդ օլիգո), որը կապակցված չէ, նույնպես ուժեղացվում է MLPA ռեակցիայում, քանի որ հակադարձ այբբենարանը կարող է կապվել RPO-ի այբբենարանի միացման վայրին: ՍԻԱՅՆ, քանի որ այս չմիացված RPO օլիգոյին բացակայում է (ֆլուորեսենտ կերպով պիտակավորված) առաջնային այբբենարանի միացման վայրը, ուժեղացումն ավարտվում է այստեղ: Ի հակադրություն, կապակցված զոնդերը պարունակում են ԵՐԿՈՒ այբբենարանների կապակցման վայր և, հետևաբար, ընդլայնվում են էքսպոնենցիալ: Ավելին, լյումինեսցենտային պիտակը ներառված է միայն ամպլիկոնների մեջ, որոնք առաջանում են կապակցված զոնդերից:


Ենթադրում եմ, որ չկապված օլիգոնուկլեոտիդը նույնպես «ուժեղացվի», բայց շատ ավելի փոքր մասշտաբով («Զոնդի միայն մի մասը»): Օրինակ՝ PCR-ի 6-րդ գործարկումից հետո դուք կստանաք 2^6=64 ամպլիկոն կապակցված զոնդ, բայց միայն 6՝ մեկ չմիացված մասի համար (?երկրորդ մեկնարկիչը նախատեսված է զոնդի հակասիտային օլիգոնուկլետիդի երկրորդ մասի վրա զտելու համար): 30 վազքից հետո կա հսկայական տարբերություն, որը թույլ է տալիս միայն ճիշտ կերպով կապակցված զոնդ հայտնաբերել: Վստահ չեմ, թե ճիշտ եմ, բայց այսպես հասկացա: Խաղաղություն :)


Դիտեք տեսանյութը: Técnica MLPA (Հունվարի 2023).